苯丙氨酸解氨酶試劑盒說明書 技術(shù)文章

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苯丙氨酸解氨酶（Phenylalnine Ammonialyase，PAL）活性檢測試劑盒

商品貨號：MS1604
英文名稱：Micro Phenylalanine Ammonia-lyase (PAL) Assay Kit
別名：苯丙氨酸解氨酶試劑盒 PAL Kit 苯丙氨酸解氨酶(PAL)試劑盒 苯丙氨酸解氨酶(PAL)測試盒
檢測方法：微量法

• 產(chǎn)品詳細(xì)介紹
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測定意義：

PAL（EC4. 3 1 5）廣泛存在于各種植物和少數(shù)微生物中，是植物體內(nèi)苯丙烷類代謝的關(guān)鍵酶，與一些重要的次生物質(zhì)如木質(zhì)素、異黃酮類植保素、黃酮類色素等合成密切相關(guān)，在植物正常生長發(fā)育和抵御病菌侵害過程中起重要作用。

測定原理：

PAL催化L-苯丙氨酸裂解為反式肉桂酸和氨，反式肉桂酸在290nm處有大吸收值，通過測定吸光值升高速率計算PAL活性。

• 產(chǎn)品說明書

貨號：MS1604                   規(guī)格：100 管/96 樣

   苯丙氨酸解氨酶（Phenylalnine ammonialyase，PAL）試劑盒說明書

                微量法 

正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

測定意義：

PAL（EC4. 3 1 5）廣泛存在于各種植物和少數(shù)微生物中，是植物體內(nèi)苯丙烷類代謝的關(guān) 鍵酶，與一些重要的次生物質(zhì)如木質(zhì)素、異黃酮類植保素、黃酮類色素等合成密切相關(guān)，在植 物正常生長發(fā)育和抵御病菌侵害過程中起重要作用。

 測定原理：

PAL 催化 L-苯丙氨酸裂解為反式肉桂酸和氨，反式肉桂酸在 290nm 處有大吸收值，通過 測定吸光值升高速率計算 PAL 活性。

自備實驗用品及儀器：

紫外分光光度計/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔 板(UV 板)、研缽、冰和蒸餾水。

 試劑的組成和配制：

提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：液體 15mL×1 瓶，4℃保存。 

試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存；臨用前加入 4mL 蒸餾水充分溶解待用；用不完的試劑 4℃ 保存； 

試劑三：液體 1mL×1 瓶，4℃保存。 

粗酶液提取：

按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液），進行冰浴勻漿。10000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。 

測定步驟：

1、分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 290nm，蒸餾水調(diào)零。 

2、準(zhǔn)備 96 孔 UV 板一塊（非普通酶標(biāo)板，普通酶標(biāo)板只能透過可見光，不能透過紫外光，檢 測波長小于 340nm 務(wù)必使用 UV 板）。

3、在 EP 管或 96 孔 UV 板中按順序加入下列試劑

試劑名稱（μ L）           測定管               對照管

樣本                      5

試劑一                  145                   150

試劑二                  40                    40

                混勻，30℃ 準(zhǔn)確反應(yīng) 30min 

試劑三                 10                     10

混勻，靜置 10min 后， 290nm 處記錄測定管吸光值 A1 和對照管吸光值 A2，△A=A1-A2。 注意：對照管只要做一管

PAL 活性計算：

用微量石英比色皿測定的計算公式如下

（1） 按蛋白濃度計算

單位定義：每 mg 組織蛋白在每 mL 反應(yīng)體系中每 min 使 290nm 下吸光值變化 0.1 為一個酶活性 單位。

 PAL（U/mg prot）=Δ A×V 反總÷（Cpr× V 樣）÷0.1÷T =13.3×Δ A÷Cpr

（2） 按樣本鮮重計算

單位定義：每 g 組織在每 mL 反應(yīng)體系中每 min 使 290nm 下吸光值變化 0.1 為一個酶活性單位。 

PAL（U/g 鮮重）＝Δ A×V 反總÷(W× V 樣÷V 樣總)÷0.1÷T =13.3×Δ A÷W

V 反總：反應(yīng)體系總體積，0.2mL； V 樣：加入樣本體積，0.005mL；V 樣總：加入提取液體積， 1 mL；T：反應(yīng)時間，30 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g。 

用 96 孔板測定的計算公式如下

（1） 按蛋白濃度計算 單位定義：每 mg 組織蛋白在每 mL 反應(yīng)體系中每 min 使 290nm 下吸光值變化 0.05 為一個酶活 性單位。

PAL（U/mg prot）=Δ A×V 反總÷（V 樣×Cpr）÷0.05÷T =26.6×Δ A÷Cpr

（2） 按樣本鮮重計算

單位定義：每 g 組織在每 mL 反應(yīng)體系中每 min 使 290nm 下吸光值變化 0.05 為一個酶活性單位。

PAL（U/g 鮮重）＝Δ A×V 反總÷(W× V 樣÷V 樣總)÷0.05÷T =26.6×Δ A÷W

V 反總：反應(yīng)體系總體積，0.2mL； V 樣：加入樣本體積，0.005mL；V 樣總：加入提取液體積， 1 mL；T：反應(yīng)時間，30 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g。

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