超氧陰離子清除能力檢測 說明 技術文章

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超氧陰離子清除能力檢測試劑盒

商品貨號：MS1518
英文名稱：Superoxide anion scavenging capacity Assay Kit
別名：超氧陰離子清除能力試劑盒 超氧陰離子清除能力測試盒
檢測方法：微量法

• 產品詳細介紹
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測定意義：

超氧陰離子自由基作為生物體代謝過程中產生的一種自由基，可攻擊生物大分子，如脂質、蛋白質、核酸和聚不飽和脂肪酸等，使其交鏈或者斷裂，引起細胞結構和功能的破壞，與機體衰老和病變有很密切的關系，清除超氧陰離子自由基的研究已經得到了廣泛的關注。

測定原理：

AP-TEMED系統產生超氧陰離子，與鹽酸羥胺反應生成NO2－，NO2－與對氨基苯磺酸和α－萘胺的作用生成紅色的偶氮化合物，在530nm處有特征吸收峰，樣品對超氧陰離子的清除能力與530nm的吸光值呈負相關。

• 產品說明書

貨號：MS1518                                      規格：100 管/96 樣

超氧陰離子清除能力試劑盒說明書 微量法

注意：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義：

超氧陰離子自由基作為生物體代謝過程中產生的一種自由基，可攻擊生物大分子，如脂質、 蛋白質、核酸和聚不飽和脂肪酸等，使其交鏈或者斷裂，引起細胞結構和功能的破壞，與機體 衰老和病變有很密切的關系，清除超氧陰離子自由基的研究已經得到了廣泛的關注。

測定原理：

AP-TEMED 系統產生超氧陰離子，與鹽酸羥胺反應生成 NO₂^－，NO₂^－與對氨基苯磺酸和 α － 萘胺的作用生成紅色的偶氮化合物，在 530nm 處有特征吸收峰，樣品對超氧陰離子的清除能力 與 530nm 的吸光值呈負相關。

自備實驗用品及儀器：

天平、研缽、低溫離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96 孔板、恒溫水 浴鍋。

試劑組成和配制：

提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：液體 1.5mL×1 支，4℃避光保存。

試劑二：粉劑×1 瓶，4℃避光保存。臨用前加 6mL 蒸餾水充分溶解。

試劑三：液體 7.5mL×1 瓶，4℃保存。

試劑四：液體 7.5mL×1 瓶，4℃避光保存。

試劑五：液體 7.5mL×1 瓶，4℃避光保存。

樣品處理：

1. 組織：按照質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g，加入 1mL 提 取液）加入提取液，冰浴勻漿后于 4℃，10000g 離心 10min，取上清置于冰上待測。

2. 細胞：按照細胞數量（10⁴個）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細 胞加入 1mL 提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時間 3min）； 然后 4℃，10000g 離心 10min，取上清置于冰上待測。

3. 培養液或其它液體：直接檢測。

4. 粉劑藥物可配制成相同濃度，比如 1mg/mL。 

測定操作：

              空白管   對照管   測定管

試劑一（μ L）     10      10       10

試劑二（μ L）            40       40

H2O（μ L）       65      25

        充分混勻，25℃反應 1min

樣品（μ L）                     25

試劑三（μ L）     50      50      50

試劑四（μ L）     50      50       50

試劑五（μ L）     50      50      50

          充分混勻，37℃顯色 20min，于微量石英比色皿/96 孔板，以空白管調零，在 530nm 處測定對             照管和測定管的吸光值，分別記為 A 對照管和 A 測定管。 

注意：空白管只需測定一次。 

計算公式：

超氧陰離子清除率 I%= (A 對照管 - A 測定管) / A 對照管  x100% 

注意事項：

1. 試劑一 4℃可保存 2 個月，配制好的試劑二 4℃可保存一周，建議實驗前配制，并盡快使用。

2. 樣品處理完后立即進行測定，或者低溫保存不超過 24 小時。

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