solarbio核酸服務(wù)
核酸服務(wù)
一、核酸的提取與純化
1、RNA的提取
新鮮組織提取效果佳，其次為液氮和-70℃及組織RNA保存液中保存的樣本，不推薦 使用-20℃及以下溫度下保存的樣本。
細(xì)菌用量：1-2ml ，需要新鮮培養(yǎng)（公司可代為培養(yǎng)，另行收費(fèi)）。
植物用量：500mg ，需要新鮮植物葉片。
細(xì)胞用量： 10 5 -10 6 ，需要新鮮培養(yǎng)（公司可代為培養(yǎng),另行收費(fèi)）。
組織用量： 500mg ，需要新鮮標(biāo)本或凍存在液氮罐中的標(biāo)本。
血液用量： 5ml ，需要新鮮標(biāo)本或凍存在液氮罐中的標(biāo)本。
2、Genomic DNA的提取
新鮮組織提取效果佳，其次為液氮和-70℃保存的樣本，-20℃不宜長(zhǎng)期保存樣本，否則提取的DNA長(zhǎng)度較短。
細(xì)菌用量： 10ml收集液，需要新鮮或 -20 ℃保存標(biāo)本。
植物用量：葉片100mg，需要新鮮或 -20 ℃保存標(biāo)本。
細(xì)胞用量： 10 5 -10 6，需要新鮮或 -20 ℃保存標(biāo)本。
組織用量： 25mg ，需要新鮮或 -20 ℃保存標(biāo)本。
血液用量： 5ml ，需要新鮮標(biāo)本或凍存在液氮罐中的標(biāo)本。
酵母用量：10 5 -10 6 或10ml液體培養(yǎng)物，需要新鮮或 -20 ℃保存標(biāo)本。
3、質(zhì)粒 DNA 的小量 / 中量 / 大量提取
高拷貝質(zhì)粒： 10ml 菌液， 25-50 μ g
低拷貝質(zhì)粒： 20ml 菌液， 15-30 μ g
高拷貝質(zhì)粒： 100-200ml 菌液， 500-1000 μ g
低拷貝質(zhì)粒： 100-200ml 菌液， 500-800 μ g
10ml 菌液， 25-50 μ g
二、PCR及RT-PCR
1、PCR擴(kuò)增條件的優(yōu)化
客戶(hù)提供模板（可代提?。┖鸵铮纱铣桑?/p>
2、常規(guī)PCR實(shí)驗(yàn)
客戶(hù)提供模板（可代提?。┖鸵铮纱铣桑?/p>
客戶(hù)提供模板（可代提取）和引物（可代合成）
客戶(hù)提供模板（可代提?。┖鸵铮纱铣桑?/p>
3、引物的設(shè)計(jì)與合成
采用兩套以上的軟件設(shè)計(jì)，保證引物的可靠性。請(qǐng)用戶(hù)提供相應(yīng)
的模板序列，通過(guò) 傳送。
OPC ，PAGE，HPLC純化
4、RNA 的反轉(zhuǎn)錄及 PCR 擴(kuò)增
由用戶(hù)提供新鮮制備的模板（可代提取）
由用戶(hù)提供引物（可代合成）
三、熒光定量PCR
服務(wù)項(xiàng)目：
常規(guī)定性分析：
通過(guò)終點(diǎn)法分析樣本中把序列的陰性/陽(yáng)性，在終點(diǎn)讀板鑒定的同時(shí)對(duì)擴(kuò)增過(guò)程進(jìn)行全程跟蹤，可及時(shí)發(fā)現(xiàn)樣本污
染、假陽(yáng)性、“弱陽(yáng)性”等情況，是目前病原體檢測(cè)等臨床應(yīng)用的佳選擇。同時(shí)也是科學(xué)研究領(lǐng)域的重要應(yīng)用技術(shù)。
相對(duì)定量：
通過(guò)對(duì)不同樣本靶基因的表達(dá)或含量進(jìn)行檢測(cè)，可以判斷不同樣本間靶基因表達(dá)的相對(duì)高低，是對(duì)不同樣本相
同靶基因表達(dá)情況的“比較”。
定量：
合成一個(gè)和某靶基因具有相同序列的片段（或構(gòu)建載體）作為標(biāo)準(zhǔn)品，通過(guò)測(cè)量OD值便可以計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)品的摩
爾濃度，不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品在相同體系（即相同擴(kuò)增效率）下對(duì)應(yīng)的ct值具有高度的*性和良好的重復(fù)性，可以
作為該基因的“標(biāo)尺”。通過(guò)對(duì)未知樣本中該靶基因ct值的檢測(cè)，便可由“標(biāo)尺”測(cè)算出未知樣本中靶基因的摩爾
濃度。達(dá)到定量的目的。
HRM分析：
高分辨率溶解曲線是一種檢測(cè)基因突變、進(jìn)行基因分型和SNP檢測(cè)的新工具，可以迅速的檢測(cè)出不同樣本中單
個(gè)堿基的差異。HRM 檢測(cè)技術(shù)操作簡(jiǎn)便，速度快，高通量，靈敏性好，特異性高，同時(shí)對(duì)試劑、儀器、軟件及經(jīng)驗(yàn)
技術(shù)也提出了較高的要求。
檢測(cè)方法：
Sybr Green I 染料法：成本較低，并且可以通過(guò)溶解曲線發(fā)現(xiàn)非特異性擴(kuò)增。
taqman 探針?lè)ǎ罕热玖戏ň哂懈叩奶禺愋?，但成本也相?duì)較高。
其他：除以上兩種常用方法，我公司ROCHE 480 II還可以滿(mǎn)足Molecular beacon、LUX等其他多種方法的檢測(cè)。