質粒提取原理及流程

質粒提取原理及流程：
較常用的質粒DNA提取方法有3種：堿裂解法、煮沸法和去污劑
（如Triton和SDS）裂解法。前兩種方法比較劇烈，適用于較小的質粒
（<15kb）。去污劑裂解法則比較溫和，一般用于分離大質粒（>15kb）。
堿裂解法是一種應用為廣泛的制備質粒DNA的方法，其原理
為：染色體DNA比質粒DNA分子大得多，且染色體DNA為線狀分
子，而質粒DNA為共價閉合環(huán)狀分子；當用堿處理DNA溶液時，
線狀染色體DNA容易發(fā)生變性，共價閉環(huán)的質粒DNA在回到中性
時即恢復其天然構象；變性染色體DNA片段與變性蛋白質和細胞
碎片結合形成沉淀，而復性的超螺旋質粒DNA分子則以溶解狀態(tài)
存在液相中，離心去除沉淀后，就可從上清中回收質粒DNA。
目前，市面上質粒提取試劑盒大多數(shù)都是采取上述的堿裂解方法，
不同之處在于純化方式。目前比較常用的純化系統(tǒng)是硅基質吸附材
料，其原理為在高鹽環(huán)境下質粒DNA能夠結合到硅基質上，然后用
低鹽緩沖液或水將質粒DNA從硅基質上洗脫下來。得到的質粒可以
用于酶切、PCR、測序、細菌轉化、轉染等分子生物學實驗。